除了平板實驗之外,秦霜還交給陸成的另外一個實驗就是Transwell侵襲實驗,侵襲實驗其實和平板劃痕實驗的性質(zhì)是差不多的。
但是兩者的目的卻是稍有差別。
很容易理解,平板劃線法是在平板上,也就是一個平面上,細(xì)胞的遷移速率,與正常組細(xì)胞進(jìn)行對比,從而得出處理組的遷移速率是快還是慢。
但是Transwell卻是不一樣的,因為Transwell小盒子的上層鋪了一層膠質(zhì),這一層膠質(zhì)可以阻擋細(xì)胞的下移,只有細(xì)胞分泌出可以溶解這一層膠質(zhì)的金屬蛋白酶,才能夠破開膠質(zhì),然后達(dá)到營養(yǎng)更加豐富的下層。
這是針對腫瘤細(xì)胞侵襲能力,也是它能夠分泌金屬蛋白酶,穿破一定的障礙物的能力,發(fā)生侵襲的實驗。
所以其實兩個實驗的模式是完全不一樣的、
因為秦霜已經(jīng)養(yǎng)好了細(xì)胞,所以陸成再進(jìn)行后續(xù)的操作的時候,就直接省去了再要重頭開始養(yǎng)細(xì)胞的步驟,
而兩個實驗中,平板劃線法的實驗最多只需要48h即可,但是這個實驗唯一有的麻煩就是,必須在6、12、18、24和48小時的時候,記錄下劃痕縮小的面積,以此來算遷移比率。
是相對比較消耗時間的一種。而Transwell實驗,也是需要計算下層更加豐富的營養(yǎng)基質(zhì)中細(xì)胞的數(shù)量,來計算兩組細(xì)胞侵襲能力的差異的。
如此一來,陸成除了明天晚上必須要守在實驗室之外,后天的相同時間,也要來到實驗室再進(jìn)行一次統(tǒng)計,這樣與他后天的手術(shù),略有沖突。
雖然最后是有沖突的,但是陸成還是選擇了在今天就完成了相應(yīng)的操作。因為在細(xì)胞鋪滿平板之前,需要經(jīng)過二十四小時的沉淀,才能夠均勻的鋪滿,然后好進(jìn)行劃線的操作。
大不了,后天讓一個師姐或是師哥幫他看一下就行了。
看到陸成利索地完成了相應(yīng)的操作,秦霜也是放下了心來。
這看似是一種破罐子破摔的行為,但是其實也是對陸成一些基礎(chǔ)實驗的一種考驗,如果陸成連平板劃線的前期準(zhǔn)備工作都做不好,那么后續(xù)的實驗操作,他可能就真的需要一點一點來學(xué)的。
而且,秦霜還注意了陸成在做Transwell實驗前期準(zhǔn)備的一個細(xì)節(jié),那就是讓腫瘤細(xì)胞處于饑餓狀態(tài)。
處于饑餓狀態(tài),也就是營養(yǎng)不足一段時間的腫瘤細(xì)胞,是更加迫切地需要大量的營養(yǎng)的,這樣可以更加增加它的侵襲力,讓實驗的操作更加具有說服力。
……
而與此同時,陸成在完成了這兩步的前期準(zhǔn)備之后,也是有實驗室的其他人,慢慢地給陸成布置了任務(wù)了。
就比如說費恩教授的兩個博士生,凱瑟琳和查爾斯,都是把簡單的細(xì)胞培養(yǎng)的操作,交給了陸成。
雖然講,細(xì)胞的培養(yǎng),也就是換液、分裝這些最為基本的操作,但是,這是一個好的開始,陸成明白自己才來實驗室第二天。
就有師兄和師姐愿意給他操作讓他練習(xí),這就是一個好的開始了,也代表了別人的認(rèn)可。
有了基礎(chǔ)的實驗放手了,那么后續(xù)的實驗,還會晚嗎?
當(dāng)天的下午,就有一個師兄主動地帶著陸成完成了一次WB的相應(yīng)操作,并且,還有一位做了過表達(dá)基因轉(zhuǎn)錄處理細(xì)胞組的師姐,還帶著陸成做了RT-PCR的操作。
陸成知道這個RT-PCR的操作目的。
這是進(jìn)行很多實驗中都是比較重要的一環(huán)。
比如說,我們需要研究一個基因,那么一般都至少會分成以下幾組。
第一組,某個基因的普通對照組,也叫陰性對照組,也就是不進(jìn)行任何的處理。
第二組,則是某個基因的過表達(dá)組,使得這個基因在某一個細(xì)胞的基因序列中高表達(dá),高表達(dá)之后,看它后續(xù)實驗中,是否會出現(xiàn)與陰性對照組不一樣的地方,來進(jìn)行判別基因的功能。
同樣的,為了避免它增多的陽性效果帶來的誤差,同時會對這個基因進(jìn)行沉默或是敲除,也就是在沉默了這段基因,不讓它表達(dá)功能的時候,與陰性組對比,是否會出現(xiàn)一系列的差異。
如此更具有說服力。
這是常規(guī)的第三分組。
第四分組,如果需要實驗更加的完善的話,那么肯定還需要用一個專門的基因沉默的藥物,與正常組作比較,證實它是可以通過藥物來沉默的,以驗證這個基因具有研究價值,甚至可能用于臨床。
以上的四個分組相互比較之后,就是一組比較完善的實驗組的分配了,做到這么系統(tǒng)的對比,說服力自然是大大加強。
但是,這一切對照組有效的前提就是,你得證明你的確是過表達(dá)了或是沉默了基因。
這個時候,就需要RT-PCR來驗證基因序列的表達(dá)量了,也是用來篩選可能出現(xiàn)的,轉(zhuǎn)染不成功,或是轉(zhuǎn)染效率很小的情況。
很多的實驗,很可能有人因為麻煩、費錢就會省掉這一步,但是這并不符合一個比較嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶嶒灹鞒痰摹?br/>
因此,陸成也是知道了RT-PCR的相關(guān)操作流程,至少看了一遍,再結(jié)合理論的知識,下一次自己要做的時候,心里至少知道該怎么做。
而且以陸成現(xiàn)在幾乎是過目不忘的能力,這些操作他只要看了一遍,幾乎就能夠完全記住,所以根本就不害怕到時候重復(fù)不出來。
……
如此一來,陸成在實驗室的第一小步,就這么走了出去。
實驗室里的人也是知道了陸成這個新人的存在,而且,在秦霜、凱瑟琳等人的介紹下,她們還同時給一些研究生的學(xué)弟和學(xué)妹交待,如果有什么簡單的,不愿意做的,比較麻煩的操作,可以讓陸成給練練手。
嘿,還真別說,因為秦霜和凱瑟琳的開口,陸成第二天就被委托了幾個實驗操作。
比如是讓陸成測幾瓶腫瘤細(xì)胞里面乳酸和葡萄糖的濃度,這些比較簡單的操作。
陸成當(dāng)然不會嫌棄他簡單啊,因為雖然操作簡單,但是量并不小。
因為知道了陸成反正要做測定乳酸和葡萄糖,于是就像實驗室里的傳統(tǒng)一樣,一些需要做這兩樣測定的所有其他人,都是不約而同的把自己的細(xì)胞交給了陸成。
堆積下來,竟然就有四份樣本需要做了。
練手的機會可是大大的有。
陸成看了一下,操作明天中午來做一下就差不多了。
……
時間緩緩而過,一下子就來到了周三。
周三的早上,陸成雖然很早就來到了實驗室,但是其實他的心情并不是很好的。
因為就像之前就預(yù)料過的,周二進(jìn)行手術(shù)的雷克斯,術(shù)中所見,并不是很好,幾乎已經(jīng)廣泛的轉(zhuǎn)移了,雖然目前沒有發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的證據(jù)。
但是,那幾乎是可以預(yù)料的事情,而且也沒有任何的化療方案對其進(jìn)行補救。
也就是說,最后,等待雷克斯的,就只有三到五年的壽命,這個年輕的小伙子就會離開世界。
當(dāng)時雷克斯的父母和雷克斯都沒辦法接受這個事實,但是,事實就是如此,這是任何人都沒有辦法逆轉(zhuǎn)的事情,這也是當(dāng)前的技術(shù)限制。
雖然他們大哭一場,但是除了自己的發(fā)泄和在陸成等人的心里留下了一絲絲的不安和不忍外,改變不了任何的事實。
即便最后雷克斯也想過要轉(zhuǎn)院去其他更好的醫(yī)院看看機會。
但是陸成覺得,即便雷克斯再怎么周轉(zhuǎn),恐怕最后也都無法逃離事實。
他的病理檢查,已經(jīng)采集了好幾次,幾乎已經(jīng)能夠確診,而且,不是說張興教授給他的化療方案不行,才導(dǎo)致的他化療無效,而是他本身就對這些化療的藥物不敏感。
這不是任何人的問題,也不是藥物的問題,就只是上限就在那里。
雖然有些難過,但是第二天該過的日子還是得過,就像張興教授今天仍然要繼續(xù)做手術(shù)一樣,就像陸成今天也要來這邊看看他昨天進(jìn)行的那些實驗操作的最后結(jié)果。
平板劃線實驗,都是陸成昨天下了雷克斯的手術(shù)之后,來實驗室做的。
因為當(dāng)時他就看到了陸成的狀態(tài)不是特別好。
的確是這樣,陸成在手術(shù)室這么久時間,這個雷克斯是他第一個遇到了,只能給他進(jìn)行姑息性手術(shù),而沒辦法進(jìn)行完整手術(shù)的人。
而且,后面的那臺手術(shù)也相對比較簡單,陸成就來實驗室做實驗了,正好調(diào)節(jié)一下心情。
陸成先是看了看昨天做的平板劃線的平板,在鏡子之下一看。
“欸!這兩條線,就比較好看了?!标懗深D時心神大振,畢竟來這里,秦霜師姐的第一個實驗就比較熟練且比較好地完成了,這對陸成產(chǎn)生自信心也是有幫助的。
于是陸成就喊秦霜過來看。
秦霜正在查文獻(xiàn),一聽到陸成的話,緩緩地回頭看了陸成一眼,
“你說什么?”就像是脖子是機器裝的,而不是肌肉,很是生硬。
秦霜覺得自己是不是聽錯了。
“秦霜師姐,你要我做的那個平板劃線實驗,我做完了,我覺得效果還挺不錯的,你要不要過來看一看?”
“我怕我看錯了?!?br/>
陸成再次確定道。
秦霜立刻離開了座位,然后風(fēng)風(fēng)火火地闖進(jìn)了細(xì)胞處置室內(nèi),接著陸成都還沒從顯微鏡下取下來的平板就看了起來。
然后看了看標(biāo)記,再看了看另一組的結(jié)果。
秦霜頓時沉默了。
兩組的差距,肉眼是能夠看得出來的,如果做成柱狀圖,必然是一張十分好看的圖片,她謝過很多文章,這樣的預(yù)判能力還是有的。
這種情況,與她之前做出來的很不一樣,她做出來的就是差異不太明顯,如果明顯了,那么不管是對照組好還是實驗組比較好,那都是極為有意義并且值得深究的。
但是,她做出來的沒有意義,然后死馬當(dāng)活馬醫(yī)地給陸成了,陸成就真的做出來了陽性結(jié)果。
這怎么說?
“你?”秦霜略有些復(fù)雜地看了看陸成,她幾乎都已經(jīng)打算放棄了當(dāng)前的實驗方案,然后另謀他路了,現(xiàn)在陸成做出來這個結(jié)果。
是不是告訴她她還需要和這個實驗方案硬磕個十次八次的。
萬一陸成做出來的是巧合或者就是個錯誤的呢?
秦霜當(dāng)即就道:“算了,我還是自己再來重復(fù)一遍吧。”
秦霜準(zhǔn)備繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞的時候,才發(fā)現(xiàn)陸成之前把相應(yīng)的細(xì)胞都用完了,所以需要她重新復(fù)蘇。
秦霜于是又問:“你在做的時候,具體的操作流程是怎么樣的?有操作記錄嗎?”
陸成自然不傻,注意到了秦霜的神態(tài)變化,趕緊道:“有的,秦霜師姐,還有其他的師姐看著我做的,操作和流程都是沒問題的,我這就拿給你?!?br/>
秦霜細(xì)致的一看,陸成的操作記錄,都是比較正規(guī)的,雖然說在用的試劑方面和她平時用的濃度不是特別一樣。
但是,試劑的濃度差異,不應(yīng)該會影響到結(jié)果的方向性才對。
秦霜心里有很多疑問,但最終還是沒有問出來,只是說:“行吧,我們明天再看,然后你再好好地看那個Transwell的結(jié)果吧,如果Transwell的結(jié)果和我重復(fù)的結(jié)果,都是和你的實驗結(jié)果是一致的。”
“那么,我們就可以進(jìn)行下一步實驗了?!?br/>
秦霜并沒有提她操作失敗的事情,倒不是因為她怕丑,而是怕陸成一下子就覺得自己站得很高,然后摔下去。
秦霜自然是注意到了兩人操作的差異,她準(zhǔn)備重復(fù)一次自己之前的實驗操作,再重復(fù)一次陸成當(dāng)前濃度的操作,這樣做對比,才能夠知道到底是不是試劑濃度的問題,影響了最終的實驗結(jié)果。
比較,對照,永遠(yuǎn)都是實驗和嚴(yán)謹(jǐn)離不開的話題。
……
再沒過多長時間,陸成那Transwell小盒下層侵襲下來的腫瘤細(xì)胞的數(shù)量,也是最終定了型,在進(jìn)行了染色之后,再進(jìn)行了計數(shù)。
陸成再一次地把秦霜喊了過來。
陸成看著這一密一稀疏的兩個實驗結(jié)果,再次沉默,然后開始查文獻(xiàn)去了。
她查的文獻(xiàn)正是與試劑濃度與實驗想過相關(guān)的最為基礎(chǔ)的文章……
這一幕,實驗室里的其他人都聽到了,頓時正在細(xì)胞房里面的幾個人就是面面相覷地看著陸成,眼神中都充滿了不可思議之色……
,